描述
H2DCFDA（2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯）是一种常用试剂，用于研究活细胞中活性氧的产生。
H2DCFDA 是一种非荧光荧光素衍生物（其还原乙酰化形式）。该试剂仅在乙酰基裂解和试剂在细胞中氧化后才开始发出荧光，同时转化为 2′,7′-二氯荧光素。这是一种亮绿色荧光染料（最大吸收 511 nm，最大荧光 533 nm）。该试剂可用于活细胞检测，但与样品固定不兼容。
H2DCFDA 中的乙酰基增加其亲脂性并改善其细胞膜通透性。一旦进入细胞，染料就会被细胞酯酶脱乙酰化，从而带电并更好地固定在细胞内。用活性氧形式氧化会形成荧光产物（2′,7′-二氯荧光素），可以使用各种方法进行检测，例如使用流式细胞仪、酶标仪或荧光显微镜。
试剂使用的建议：
- 使用新鲜配制的试剂溶液（由于试剂逐渐氧化，工作溶液不能长期储存）。
- 为特定细胞系和测定条件选择试剂的最佳工作浓度和试剂脱乙酰和氧化所需的孵育时间。如果没有针对特定细胞系推荐的方案，请从 1 到 10 µM 的浓度开始并孵育 30 分钟。
- 不要在有血清的情况下将染料与细胞一起孵育，因为它含有裂解 H2DCFDA 的酶。
